隨著質(zhì)譜技術(shù)的發(fā)展,質(zhì)譜技術(shù)的應(yīng)用領(lǐng)域也越來越廣。由于質(zhì)譜分析具有靈敏度高,樣品用量少,分析速度快,分離和鑒定同時(shí)進(jìn)行等優(yōu)點(diǎn),因此,質(zhì)譜技術(shù)廣泛的應(yīng)用于化學(xué),化工,環(huán)境,能源,醫(yī)藥,運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué),刑事科學(xué)技術(shù),生命科學(xué),材料科學(xué)等各個(gè)領(lǐng)域。
在質(zhì)譜分析中,同位素內(nèi)標(biāo)法是以穩(wěn)定同位素標(biāo)記化合物作為內(nèi)標(biāo),利用待測(cè)物與內(nèi)標(biāo)的響應(yīng)豐度比值(峰面積比)進(jìn)行線性回歸,通過對(duì)同位素豐度的準(zhǔn)確質(zhì)譜測(cè)量和對(duì)加入的內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)確稱量,做到對(duì)待測(cè)物的定量測(cè)定。該技術(shù)不需要對(duì)待測(cè)物進(jìn)行定量分離、能有效消除基質(zhì)干擾、檢測(cè)靈敏度高等優(yōu)點(diǎn),已在食品、環(huán)境、臨床、藥物等分析領(lǐng)域中得到廣泛應(yīng)用。
我們先看下同位素內(nèi)標(biāo)是如何消除基質(zhì)效應(yīng)的?
首先我們來看下電噴霧電離(ESI)的原理
01第一步,溶液在噴霧毛細(xì)管形成自由的帶電霧滴。
02第二步,通過溶劑蒸發(fā)和霧滴分裂使帶電霧滴變小,這一過程反復(fù)進(jìn)行,直至生成很小的帶電霧滴。
03第三步,當(dāng)靜電排斥力大于引力時(shí),很小的帶電霧滴釋放出分析物離子。
很明顯地,如果有任何干擾物質(zhì)影響了分析物在液滴表面的離子化過程或者形成了競(jìng)爭(zhēng),那么就會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果的精密度和準(zhǔn)確度,這種就是基質(zhì)效應(yīng)。也有人認(rèn)為基質(zhì)效應(yīng)是由于干擾物和分析物共洗脫所致。這些干擾物隨樣品的不同而不同,比如有鹽、脂肪、表面活性劑和其他極性物質(zhì)等。
基質(zhì)效應(yīng)不能通過傳統(tǒng)的內(nèi)標(biāo)來消除,這是因?yàn)閭鹘y(tǒng)的內(nèi)標(biāo)和分析物因?yàn)闃悠坊|(zhì)不同,導(dǎo)致分析物和內(nèi)標(biāo)的檢測(cè)結(jié)果大不相同,增加了檢測(cè)結(jié)果的不確定性。
但是可以通過在樣品中加入同位素內(nèi)標(biāo)法來消除基質(zhì)效應(yīng),同位素內(nèi)標(biāo)和分析物結(jié)構(gòu)相似,因此和分析物在樣品基質(zhì)中的表現(xiàn)一樣。因此在多分析物檢測(cè)時(shí),為每個(gè)分析物挑選合適的同位素內(nèi)標(biāo)可以確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
那么在檢測(cè)中,我們應(yīng)該如何挑選同位素內(nèi)標(biāo)?
1應(yīng)盡量選擇同位素豐度>98%以上的標(biāo)準(zhǔn)品。
2因?yàn)殡a(chǎn)品容易和液相流動(dòng)相溶劑中的活潑氫發(fā)生交換, 為了提高質(zhì)譜檢測(cè)的靈敏度和準(zhǔn)確率,建議液相盡量選擇非氘代的同位素標(biāo)記產(chǎn)品,如13C,15N等。
3如果選擇氘代產(chǎn)品作為內(nèi)標(biāo),需選擇質(zhì)量差大于3(D3以上)的產(chǎn)品。
4同位素取代的位置也非常重要,根據(jù)檢測(cè)方法選擇合適的同位素